Sintesis reagen imunokimia untuk deteksi okratoksin dengan metode imunokromatografik nanopartikel emas Synthesis of immunochemical reagent for ochratoxin detection using gold nanoparticle immunochromatographic method

Abstract

Abstract

   The quality of Indonesiam coffee andcocoa products has been declined due to the contamination of fungi producing ochratoxin, a serious human mycotoxin. Therefore, develop-ment of fast, accurate and simple method for early detection of ochratoxin contamination is required. As a part of research attempted to develop early detection technique of ochratoxin in severall commodities, especially agricultural products, the objective of this study was to produce immunochemical reagent for ochratoxin detectionusing immunoglobulin Y (IgY) based on immunochromatographic method. Results showed that OTA-OVA could be synthesized using active ester method with addition of N-hydroxy-succiimide and dicyclocarboimide. The inter-mediate compound produced showed C=O stretching vibrational band at 1600 cm^-1 and C-O stretching vibrational band at 1300-1000 cm^-1. Antibody-gold nanoparticle conjugate was optimally produced at pH 9 and with antibody dilution of 1:7.5 (v/v). There was 50 nm absorb-tion shift in visible absorbtion after the antibody was conjugated with gold nanoparticle. Even though the test strip did not show  clear visual-ization, the cut off of ochratoxin concentrationis obviously determined at 10 ppb. This results suggest thatthe technique could be used to detect ochratoxin contamination. 

Abstrak

Komoditas kopi dan kakao Indonesia ter-kendala masalah mutu produk yang rendah akibat kontaminasi jamur yang menghasilkan okra-toksin. Okratoksin merupakan mikotoksin yang membahayakan kesehatan manusia. Oleh karena itu, cara deteksi dini kontaminasi okratoksin yang cepat, akurat dan mudah perlu dikembangkan. Sebagai bagian dari usaha untuk mengembangkan teknik deteksi dini okratoksin pada pada berbagai komoditas, khususnya produk pertanian, pene-litian ini bertujuan menghasilkan reagen imuno-kimia yang menggunakan antibodi immune-globulin Y (IgY) berdasarkan metode imunokro-matografik untuk deteksi okratoksin. Hasil penelitian menunjukkan bahwa OTA-OVA dapat disintesis dengan metode ester aktif dengan menambahkan N-hidroksisuksiimida dan disiklo-karboimida. Senyawa antara yang dihasilkan memiliki absorpsi pada frekuensi 1600 cm^-1 yang menunjukkan adanya vibrasi ulur ikatan C=O dan adanya banyak absorpsi pada 1300-1000 cm^-1 yang mengindikasikan adanya serapan ulur yang kuat ikatan C-O. Konjugat antibodi-nanopartikel emas dihasilkan optimum pada pH 9 dan dengan pengenceran antibodi 1:7,5 (v/v). Hasil pengujian spektrofotometer visible menunjukkan adanya pergeseran serapan sebesar 50 nm setelah anti-bodi dikonjugasikan pada nanopartikel emas. Meskipun secara visual tidak begitu jelas, tetapi hasil pengujian pada teststrip menunjukkan bahwa nilai cut off konsentrasi okratoksin yang terdeteksi adalah10 ppb. Hasil ini menunjukkan bahwa teknik yang dikembangkan dapat diguna-kan untuk deteksi kontaminasi okratoksin.