Produksi imunoglobulin Y (IgY) untuk pengembangan metode deteksi dini kontaminasi okratoksin (Immunoglobulin Y (IgY) production to develop an early detection method for ochratoxin contamination)

Abstract

Indonesian coffee and cocoa commodities are constrained by low product quality problem due to contamination of fungal metabolites which  producing ochratoxin A (OTA). Ochratoxin is neprotoxic, immunogenic, carcinogenic and teratogenic to the human health. Early detection method on site detection should be developed  because of  those negative effects. The aim of this study  was to produce antibody to develop a method for  OTA detection. Antibody was produced by immunization of egg laying hen. Antibody-produced was sepatared and analyzed using ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) and DBIA (dot blot immunoassay),and tested its composition using HPLC and SDS PAGE. The results showed that anti-OTA polyclonal antibodies had been obtained already from chicken eggs in the 4^th period (7 weeks after initial immunization). These antibodies showed anti-OTA reactivity by DBIA method and still showed anti-OTA reactivity up to 9^th period (12 weeks after initial immunization). The anti-BSA antibodies produced should be removed to increase the sensitivity of antibodies againts ochratoxin A. The separation of BSA antibodies can be conducted by the absorption of the protein.

 [Keywords: ochratoxin A; early detection; antibody IgY].

Abstrak

Komoditas kopi dan kakao Indonesia terkendala masalah mutu produk yang rendah akibat kontaminasi cendawan penghasil okratoksin A. Okratoksin A (OTA) bersifat neprotoksik, imunogenik, karsinogenik dan teratogenik yang membahayakan kesehatan manusia. Karena efek negatif yang diakibatkan oleh mikotoksin ini, maka perlu dikembangkan deteksi dini kontaminasi okratoksin langsung di lokasi. Penelitian ini bertujuan menghasilkan antibodi imunoglobulin Y (IgY) untuk mengembangkan metode perakitan perangkat deteksi cepat berbasis imunologi untuk deteksi OTA. Antibodi dihasilkan menggunakan uji ayam petelur. Antibodi yang dihasilkan dipisahkan dan dianalisis aktivitasnya dengan ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) dan DBIA (dot blot immunoassay), serta diuji komposisinya dengan HPLC dan SDS PAGE. Hasil penelitian menunjukkan bahwa antibodi poliklonal anti-OTA sudah diperoleh dari telur ayam pada periode ke-4 (7 minggu setelah imunisasi awal). Antibodi ini menunjukkan reaktivitas anti-OTA dengan metode DBIA dan masih menunjukkan reaktivitas anti-OTA sampai periode 9 (12 minggu setelah imunisasi awal). Komposisi asam amino antibodi anti-OTA menunjukkan perbedaan dengan komposisi asam amino IgY di database. Antibodi anti BSA yang dihasilkan harus dihilangkan terlebih dahulu untuk meningkatkan sensitivitas antibodi terhadap okratoksin A dan pemisahan dapat dilakukan dengan penyerapan antibodi BSA.

[Kata Kunci:  okratoksin A;  deteksi dini; antibodi IgY].